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徐州市婦幼保健院Y染色體AZFc區微缺失檢測技術新研究

  全程導醫網 徐州婦幼保健頻道:遺傳醫學中心主管技師張燕、邵芳成功在中科院分區二區Microchemical Journal期刊上發表了題為《Establishment and evaluation of rapid detection of AZFc deletion on Y chromosome based on multienzyme isothermal rapid amplification》的文章,影響因子4.9。

  研究成果

  Y染色體微缺失是導致男性不育的重要遺傳學因素,無精子癥因子(Azoospermia factor,AZF)位于Y染色體長臂上,分為AZFa、AZFb、AZFc三個區域,其中AZFc區的缺失率最高,該區缺失的患者其精子質量從無到正常,且精子數量會隨著年齡的增長呈進行性下降趨勢。

  臨床上針對Y染色體微缺失的檢測方法主要有多重實時熒光PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)法和多重連接依賴探針擴增技術(Multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA),這兩種方法由于檢測環境要求高及檢測耗時長的限制,使得Y染色體微缺失很難在基層醫院開展,導致缺失患者不能得到及時檢測。

  本研究在多酶恒溫快速擴增(Multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA)技術的基礎上結合實時熒光技術和側流層析試紙條(Lateral flow dipstick,LFD )技術開發了兩種快速檢測AZFc區缺失的新方法:三重實時熒光(RT-MIRA)法(實時顯示擴增曲線)、三重側流層析試紙條(MIRA-LFD)法(將擴增產物稀釋后加入三重核酸檢測試紙條中進行顯色,5 ~ 15min內判讀結果)。這兩種方法只需39℃恒溫15 ~ 20 min即可完成擴增,具有靈敏度高、特異性強、可靠、快速、經濟等優點,適用于包括基層單位在內的醫療機構使用,方便廣大男性及早進行AZFc區檢測。

  本研究選取了AZFc區的兩個檢測位點sY254、sY255位點,選取Y染色體短臂上性別決定基因(Sex-determining region of Y chromosome,SRY)作為內對照位點,分別設計各位點的RT-MIRA法和MIRA-LFD法的引物和探針,同時設計各位點的質粒模板序列,通過引物和探針濃度優化分別構建三重RT-MIRA法和三重MIRA-LFD法反應體系。

  實驗結果:

  以質粒為模板,三重RT-MIRA法和三重MIRA-LFD法的檢出限分別為10 fg/µL和1 fg/µL。

  以商品化多重RT-qPCR試劑盒中的陽性對照為模板,兩種新方法和多重RT-qPCR法的最低檢出限均為295 pg/µL。

  本研究收集了自2018年4月~2023年12月于徐州市婦幼保健院進行Y染色體微缺失檢測時剩余的50例自患者外周血中提取的DNA樣本,采用本研究開發的兩種新方法分別對其進行檢測,發現兩種新方法的50例臨床樣本的檢測結果與傳統方法的檢測結果相一致。

  下圖展示了兩種新方法的樣本檢測結果示意圖。

  徐州導醫熱線:0516-85707122

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